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Article Published: March 31, 2023 | Aditi Verma, PhD The ability to alter the genetic composition of living cells has revolutionized biology. Scientific advances, from treating genetic disorders through gene therapy to reprograming skin cells into neurons, have been made possible by the increasing proficiency in introducing foreign nucleic acids (DNA and RNA) into cells using a technique known a..

1.콜라겐 파괴효소 저해제(MAI Complex) Matrix Metallo Proteinase Inhibitor (MAI Complex)는 콜라겐섬유를 분해시키고, 피부 세포간 구성물질(Extracellularmatrix)의 그물구조를 피괴시키며 노화를 유도하는 효소의 활성을 억제합니다. 2. 콜라겐 파괴효소(MMP)는 피부에 존재하는 효소들로 피부의 세포간 공간을 형성하는 거대분자들을 퇴화시키는 작용을 하고 있습니다. MMP의 피부내 균형은 조직내의 파괴 효소 억제 인자들에 의해 자연적으로 조절되지만 노화나 자외선 같은 환경적인 자극에 의해 효소의 균형이 파괴됩니다. 이런 분해효소의 과다 생성으로 인해 세포간 물질의 구조에 붕괴가 일어나며 주름살, 탄력감소, 모세혈관의 확장과 같은 피부 노화 현상이 ..

DEPC-treated water: DEPC는 NH2, SH, OH group들을 modify하여 RNase를 비롯한 여러 protein의 enzyme activity를 불활성화시킨다. DEPC처리는 매우 효과적인 방법으로, RNA와 접촉할 solution을 처리하는 데에 유용하다. Ambion의 DEPC-treated water는 packing 전에 한 번, 후에 한 번 모두 autoclave를 하여, 확실한 멸균 처리 및 DEPC의 완전한 inactivation을 보장한다. DEPC interacts with the active site histidine residue of RNAse and irreversibly inactivates RNAses. DEPC: 현재까지 거의 대부분의 실험지침서에서 R..

Northern Blot 1975년 Southern EM이 제한효소를 절단해서 agarose gel 전기 영동으로 분획한 DNA 단편을 직접 Nitro-cellulose filter에 옮기는 방법을 개발했다. 이 Southern blot는 유전자 해석 수단으로서 아주 유용하기 때문에 그 후 널리 이용되고 있다. 1977년 Stark는 agarose gel 전기 영동으로 분획한 RNA를 filter에 옮기는 방법을 개발했다. 이 방법은 DNA에 대한Southern blot 와 대비시켜 Northern blot로 부르게 되었다. 1. 목적 RNA의 정성, 정량을 행하기 위하여 이용된다. 이 방법에 의해 RNA의 크기나 발현 량의 정보가 얻어져 mRNA의 발현이 어느정도 행하여져 있는가를 알 수 있다. 2. ..

Homologous Recombination Method (and Knockout Mouse) When an investigator wants to replace one allele with an engineered construct but not affect any other locus in the genome, then the method of choice is homologous recombination. To perform homolgous recombination, you must know the DNA sequence of the gene you want to replace (figure 1). With this information, it is possible to replace any ge..

AFLP는 PCR기법을 이용하여 유전체 내의 여러 DNA 조각을 증폭하고 이것을 전기영동을 이용하여 관찰하는 기법이다. PCR 조건에 따라 민감하게 차이를 보이는 RAPD보다 재현성(reproducibility)이 좋으며 매우 많은 좌위를 한 번의 PCR로 관찰할 수 있다는 장점을 가진다. AFLP는 DNA를 특정 제한효소를 이용하여 자른다. 일반적으로 서로 다른 두 종류의 제한효소로 자른다. 잘려진 양끝은 sticky ends를 보이는 데 여기에 인위적으로 제작한 linker를 붙여준다. Linker에 있는 염기서열을 이용하여 제작된 PCR 프라이머를 이용하여 preamplification을 한다. 그런데 preamplification에 쓰이는 PCR 프라이머는 linker의 염기서열뒤쪽으로 임의의 염..

7. Cloning Vectors for Organisms Other than E. coli 대부분의 cloning 실험은 숙주로서 E. coli 와 함께 수행되며, 매우 다양한 cloning vector 들이 이 생물체에 대해 유용하다. Cloning 실험의 목적이 유전자 구조와 기능 같은 분자생물학적인 기본적 특징을 연구할 때 특히 그렇다. 그러나 어떤 경우에는 gene cloning 실험을 위해 다른 숙주를 이용하는 것이 바람직할 수도 있다. 이것은 그 목적이 유전자 연구가 아니라 중요한 대사산물(ex, hormone)의 합성을 조절하거나 향상시키고, 또는 생물체의 특징을 변화시키는(ex, 제초제 저항성 농작물에 도입시키는 등) cloning 기법을 사용하는 생물공학분야에서 특히 그렇다. 따라서 E..

생화학에서 말하는 염해(salting in) 염석(salting out) 개념은 대부분 단백질의 용해도와 관련되어 설명하게 됩니다. 염(salt)은 단백질의 용해도에 큰 영향을 미칩니다. 단백질의 용해도에 미치는 염의 영향력은 그 염의 양이온 혹은 음이온의 전하수와 그 염의 농도에 의해 결정되는 이온 강도에 따라 좌우됩니다. 비교적 낮은 농도의 염은 단백질의 용해도를 증가시킵니다. 이를 염해(salting in)라고 합니다. → 단백질 분자는 낮은 이온세기의 수용액에서 이온들에 의해 둘러 싸이게 되며 단백질의 화학적 활성(chemical activity)이 감소하게 됩니다. 이렇게 되면 단백질 분자간의 전기적 결합(electrostatic interaction)이 감소하게 되며 용해도가 증가하게 됩니다...